溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間:2019-09-02 瀏覽次數(shù):2110
鏈球菌在自然界中分布較廣,存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中,可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染,也可通過被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品對人類進(jìn)行感染。
根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長繁殖后是否溶血及其溶血性質(zhì)分為三類。
(1)α-溶血性鏈球菌(α-hemolytic streptococcus):菌落周圍有1-2mm寬的草綠色溶血環(huán),環(huán)內(nèi)紅細(xì)胞未溶解,血紅蛋白變成綠色這類鏈球菌亦稱為草綠色鏈球菌,也稱甲型溶血。此類細(xì)菌致病力不強(qiáng),多為條件致病菌。
(2)β-溶血性鏈球菌(β-hemolytic streptococcus):菌落周圍形成一個(gè)2-4mm寬、界限分明、完全透明的無色溶血環(huán),也稱乙型溶血,因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌,該菌的致病力強(qiáng),常引起人類和動物的多種疾病。
(3)γ-溶血鏈球菌(γ-streptococcus):不產(chǎn)生溶血素,菌落周圍無溶血環(huán),也稱為丙型或不溶血性鏈球菌(Streptococcus non-hemolytics),該菌無致病性,常存在于乳類和糞便中,偶爾也引起感染。
α、β、γ溶血現(xiàn)象圖
在食品標(biāo)準(zhǔn)4789、公共場所標(biāo)準(zhǔn)18204以及衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)WS394都有對致病能力強(qiáng)的β-溶血性鏈球菌的相關(guān)檢驗(yàn)說明。
標(biāo)準(zhǔn)4789.11-2014的檢驗(yàn)流程圖
溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面突起、圓形、邊緣整齊,并產(chǎn)生β 型溶血。
乙型溶血性鏈球菌
鑒定溶血性鏈球菌一般要挑取平板上的典型菌落,首先接種哥倫比亞血瓊脂平板和TSB增菌液進(jìn)行分純培養(yǎng),然后做革蘭氏染色以及觸酶實(shí)驗(yàn)。
檢測步驟一:革蘭氏染色鏡檢
挑取可疑菌落染色鏡檢。β型溶血性鏈球菌為革蘭氏染色陽性,球形或卵圓形,常排列成短鏈狀。(老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后,會轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。)
鏈球菌革蘭氏染色顯微鏡圖
檢測步驟二:觸酶試驗(yàn)
挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上,滴加適量3%過氧化氫溶液,立即產(chǎn)生氣泡者為陽性。β型溶血性鏈球菌觸酶為陰性。(鏈球菌與葡萄球菌不同,不產(chǎn)生過氧化氫酶)
左邊為過氧化氫陰性 右邊為過氧化氫陽性
檢測步驟三:鏈激酶試驗(yàn)(選做項(xiàng)目)
這個(gè)實(shí)驗(yàn)所用的血必須是人血,用兔血或者羊血都是做不出來的。
健康人的血漿中含有一種酶原,稱為胞漿原。胞漿原在正常狀態(tài)下不活動,如被溶血性鏈球菌產(chǎn)生的激活酶作用后,胞漿原即變?yōu)榛顒有缘陌麧{素,能溶解纖維蛋白,能產(chǎn)生激活酶的鏈球菌主要有A,C,G等群。凝固塊重新完全溶解為陽性,不溶解為陰性,β型溶血性鏈球菌為陽性。
桿菌肽(bacitracin)敏感試驗(yàn)(4789.11-2003舊標(biāo)準(zhǔn))
主要用于β型溶血性鏈球菌的A群與非A群鏈球菌的鑒別。此法可作為篩選試驗(yàn)。
操作步驟:0.04U桿菌肽藥敏紙片貼在涂布有待測菌的血瓊脂平板上,36℃培養(yǎng)18-24h后,觀察抑菌環(huán)以判斷是否為敏感。如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽性,用已知的陽性菌株(ATCC32210)做對照。
左邊是鏈球菌C群無抑菌圈,
右邊是致病性溶血性鏈球菌A群有抑菌圈