微生物實(shí)驗(yàn)室如果從事致病菌檢測(cè)、培養(yǎng)基質(zhì)控驗(yàn)收、方法驗(yàn)證等相關(guān)工作，就應(yīng)該備有質(zhì)控菌株。實(shí)驗(yàn)室需對(duì)使用的質(zhì)控菌株進(jìn)行規(guī)范性管理，以便有效地、安全地使用，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，今天環(huán)凱為大家總結(jié)了實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控菌株復(fù)蘇保存過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題。

1. 菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出來(lái)活化的話屬于第幾代？

答：保存的是第三代復(fù)活出來(lái)后，如果采用平板或肉湯活化相當(dāng)于轉(zhuǎn)接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來(lái)的代數(shù)。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉(zhuǎn)接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復(fù)蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉(zhuǎn)移沒(méi)有繁殖就不是傳代，需要注意。

2. 菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎？

答：不一定非挑單菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是說(shuō)從同一個(gè)菌落純化出來(lái)的，以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑，寧多勿少。

3. 菌株冷凍保存是-70℃還是-80℃有具體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定么？

答：其實(shí)是有標(biāo)準(zhǔn)的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規(guī)保藏技術(shù)規(guī)程》是關(guān)于菌株保藏的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，大家可以學(xué)習(xí)一下，各個(gè)保存方式都有介紹，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時(shí)里面還沒(méi)有收錄。

4. 怎樣延長(zhǎng)質(zhì)控菌株的保存時(shí)間呢？

答：大量的實(shí)驗(yàn)證明質(zhì)控菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)的條件下保存效果是最好的，越接近這種保存條件，菌株的保存時(shí)間越長(zhǎng)。

5. 怎樣純化質(zhì)控菌株？

答：純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉(zhuǎn)挑取單菌落劃線再分離出單菌落，這就相當(dāng)于純化了。

6. 我們只保存第一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認(rèn)證老師會(huì)不會(huì)認(rèn)為這是個(gè)錯(cuò)誤？

答：應(yīng)該不會(huì)，認(rèn)證老師不會(huì)提出這種問(wèn)題的，不過(guò)最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些，使用時(shí)工作菌株最好使用第三代菌株，第一代菌株可作為長(zhǎng)期保存用。

7. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：多傳代幾次后菌株的活力會(huì)明顯提高，但最多傳代到第五代后就不能用了，因?yàn)榈谖宕缶觌m然不會(huì)完全變異，但變異率會(huì)明顯增加，因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的，若使用第一、第二代菌株活力沒(méi)有那么強(qiáng)。

8. 質(zhì)控菌株是不是傳代超過(guò)五代就必須銷毀處理？

答：不一定。傳代超過(guò)五代只是存在菌種變異可能，但如果傳代到第六代、第七代……，經(jīng)過(guò)形態(tài)、生化特性、DNA特征等驗(yàn)證，性狀保持穩(wěn)定，那么這些五代后的菌還是可以正常使用。

9. 菌種編號(hào)意義？

答：以金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003為例CMCC為中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心縮寫，其它常見(jiàn)菌種保藏中心還包括ATCC（美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所）、CICC（工業(yè)微生物菌種保藏中心）、FSCC（食品安全菌種保藏中心）；B的意思是細(xì)菌，對(duì)應(yīng)還有F（真菌）；26003為CMCC的保藏編號(hào)。

10. 同樣是金黃色葡萄球菌，ATCC6538與ATCC25923有什么不同？

表明其來(lái)源不同，生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力較ATCC25923要強(qiáng)。

11. 使用磁珠保藏管保存質(zhì)控菌株，加入菌液搖勻后為什么要吸干菌液？

防止剩余菌液冷凍后形成冰晶損傷保存的菌株。

12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里嗎？

2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存，否則會(huì)很快死亡。

13. 復(fù)蘇凍干質(zhì)控菌株是否可以采用液體培養(yǎng)基？

答：可以，但建議使用平板培養(yǎng)基復(fù)蘇凍干菌株。有助于分辨復(fù)蘇出來(lái)菌株是否有污染，同時(shí)可初步觀察菌落形態(tài)以鑒定菌株純度。使用液體復(fù)蘇的話只能觀察到培養(yǎng)基混濁，無(wú)法確定是否有污染。

14. 復(fù)蘇凍干質(zhì)控菌株是否可以采用顯色培養(yǎng)基？

答：不建議采用顯色培養(yǎng)基復(fù)蘇凍干菌株。凍干菌株復(fù)蘇需要一個(gè)最適生長(zhǎng)環(huán)境，復(fù)蘇培養(yǎng)基不能選用選擇性培養(yǎng)基或顯色培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基里面含有抑菌成分不利于菌株復(fù)蘇。

15. 產(chǎn)氣莢膜梭菌做凍存時(shí)是否需要保持厭氧狀態(tài)？

答：不需要，產(chǎn)氣莢膜梭菌雖屬厭氧性細(xì)菌，但對(duì)厭氧程度要求并不太嚴(yán)格，按照一般菌株凍存方法進(jìn)行凍存即可。