懸滴法

用懸滴法，通過鏡檢觀察細菌細胞是否具有運動性，可以通過普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時光線不宜太強，要適當減弱。具體操作步驟方法如下。

待測菌株先在肉湯中培養(yǎng)18 h~24 h,也可以從生長了18 h-24 h的營養(yǎng)瓊脂斜面上挑取少量菌落用1滴肉湯或生理鹽水乳化，注意菌株的濃度不要太大。通過以下方法可以將1滴菌懸液懸浮在凹槽載玻片的蓋玻片上。

1. 具體操作步驟

（1）取一潔凈的蓋玻片，在蓋玻片四周點上凡士林(見圖5-16)。

（2）用接種環(huán)挑取一小環(huán)菌株置于操作好的干凈蓋玻片上，不要讓液滴散開(見圖5-17)。

（3）將凹槽載玻片蓋在蓋玻片上，保持菌滴在槽中間，緩慢用力壓下載玻片，借助凡士林的黏性使載玻片和蓋玻片結合在一起(見圖5-18),快速平穩(wěn)地將玻片反轉過來，菌滴應處于懸滴狀態(tài)(見圖5-19)。盡快觀察。

（4）觀察懸滴玻片時，將鏡下聚光鏡從其正常位置略微下調(diào)，并使光圈幾乎處于全關閉狀態(tài)。這是因為未染色的菌體在太亮的環(huán)境下難于被觀察到，而且，光造成的熱效應會使菌體喪失運動性。

（5）首先用低倍物鏡聚焦懸液的邊緣，移動載玻片，讓懸液在視野的中央。通過觀察液滴邊緣線外出現(xiàn)的小冷凝水滴能夠很容易識別出懸滴的位置。換成高倍物鏡(40倍)對液滴邊緣重新聚焦。必要時，略微打開光圈。這時細菌應很容易觀察到，尤其在液滴的邊緣，深度較淺，細菌停留在有限的空間領域。用油鏡觀察玻片時，因為聚焦時鏡頭的移動可能造成蓋玻片移動，從而造成液滴流動。這會嚴重影響觀察效果，沒有經(jīng)驗的人員甚至還會誤認為是菌體在運動。

注意：必須正確區(qū)分布朗運動(一種液體中懸浮的微小粒子的連續(xù)運動，是由于液體周圍的分子不對稱的撞擊造成的)、玻片輕微傾斜造成的一個方向上的漂移和真正的菌體運動。

有時可以根據(jù)運動方式的不同來鑒定菌種，如李斯特氏菌是翻跟頭式的運動，噬胞菌為滑行運動。要想通過運動方式來鑒定菌種，就必須熟悉不同菌種的運動方式，觀察比較已知菌株的運動情況可以不斷積累經(jīng)驗。

2. 注意事項

檢驗時應注意以下幾點：

（1）細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為運動性。由于細菌細胞太小，在懸液中有布朗運動，即每個細胞均在原地顫動，彼此的位置關系卻沒改變，切不可將這種現(xiàn)象誤判為具運動性。由于載玻片與蓋玻片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調(diào)焦時，懸液在蓋玻片下流動。這時可看到大批細菌細胞都以同一速度向同一方向運動，這也不是真正的運動性。真正的運動性應是細菌細胞彼此的位置關系明顯的改變。細菌的運動性因種或菌株而異。有的運動迅速，有的運動緩慢。能運動的菌株也不一定每個細胞都同時運動，常常是大多數(shù)細胞不運動，少數(shù)細胞明顯運動。

（2）有些細胞不以鞭毛運動，而是滑動。鏡檢時應注意與游動區(qū)分開。一般游動速度高，滑動則遲緩。游動只能在懸液中運動，滑動則須附在固體表面進行。

（3）如室溫太低，以致載物臺溫度太低。有的細菌會因溫度太低而不能運動，應該設法提高載物臺或載玻片的溫度，達到試驗菌能運動的溫度(如在室溫較高的試驗室鏡檢，或將載玻片放置保溫箱中一會兒再觀察)。

（4）鏡檢好氧菌時，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗菌不能表現(xiàn)出運動性，遇到這種情況則應使蓋玻片下殘留一兩個小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋玻片邊緣的細菌運動性。

（5）用油鏡觀察時，蓋玻片的厚度以不超過0. 17 mm為宜。用過厚的蓋玻片，調(diào)焦有困難。用相差油鏡觀察時載玻片的厚度以約為1.2 mm為宜。

半固體穿刺

根據(jù)有鞭毛的細菌可以在半固體培養(yǎng)基中游動卻又不能任意游走的現(xiàn)象，觀察細菌生長情況，判定試驗菌是否有運動性，可使用試驗菌能良好生長的培養(yǎng)基，在其中加入0.3%~0.6%的瓊脂(所用瓊脂的量可因品牌不同而異),一般半固體培養(yǎng)基應是放倒試管不流動，而在手上輕輕敲打時瓊脂即破裂為宜。對一般常見細菌可結合葡萄糖氧化發(fā)酵試驗觀察運動性。

用直針穿刺接種試驗菌于半固體培養(yǎng)基內(nèi)(見圖5-20),適溫培養(yǎng)。細菌的運動性可用透射光目測。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗菌無運動性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表明試驗菌株有運動性。對生長快的細菌培養(yǎng)1d后觀察。如第一天不能判定可在第2d-3d再觀察。如2d-3d時仍不能判定是否有運動性，可延遲5d-6d再觀察一次。因為游動力弱的細菌，在半固體培養(yǎng)基中第1d-2d中尚不能從穿刺線游開，故需多培養(yǎng)幾天再觀察。如試驗菌在半固體培養(yǎng)基中產(chǎn)氣泡會影響穿刺線上的生長物的擴散情況，不可誤將不運動的細菌判為有運動性。如試驗菌是好氧細菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養(yǎng)基表面向下滲入的生長物的情況。

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