一、微生物實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

1、工作室要矮小平整、光滑、無凹凸不平或棱角、四壁及屋頂用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌。

2、室內(nèi)采光面積應(yīng)大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)的情況。

3、為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。

4、無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺(tái)以一米為宜，其電源開關(guān)應(yīng)設(shè)在室外。

5、無菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)推拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門要錯(cuò)開，以免空氣對(duì)流造成污染。

二、使用無菌室注意事項(xiàng)

1、無菌室要保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放最必須的檢驗(yàn)用品，如：酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、記號(hào)筆等。

2、室內(nèi)檢驗(yàn)用具及桌凳應(yīng)保持固定位置，不隨便移動(dòng)。

3、每2周用2%消毒液（二氧化氯等）水溶液擦拭工作臺(tái)、門、窗、桌凳及地面，然后用二氧化氯溶液噴霧消毒空氣或過氧乙酸熏蒸，最后紫外燈殺菌。

4、定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀態(tài)，進(jìn)行細(xì)菌和霉菌的檢查。潔凈區(qū)沉降菌及浮游菌監(jiān)測(cè)可采用環(huán)凱三層無菌包裝系列培養(yǎng)基（TSA、SDA、營(yíng)養(yǎng)瓊脂）及浮游菌采樣器。

5、無菌室殺菌前應(yīng)將所有物品置于操作之部位，然后打開紫外燈殺菌半小時(shí)，時(shí)間一到，關(guān)閉紫外燈待用。

6、操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。

三、配制培養(yǎng)基注意事項(xiàng)

1、滅菌時(shí)嚴(yán)格按照規(guī)定加熱、加壓，切忌時(shí)間過長(zhǎng)壓力過高，否則會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)成分的破壞。

2、切忌使用銅鍋、鐵鍋配制培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng)基不能二次高壓滅菌。

四、無菌操作注意事項(xiàng)

1、進(jìn)入無菌室之前先進(jìn)行空氣消毒，工作人員進(jìn)入無菌室以前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。

2、動(dòng)作要輕，盡量減少走動(dòng)，以免攪動(dòng)空氣。

3、操作要靠近酒精燈火焰區(qū)，使用吸管要用吸球。

4、接種環(huán)/接種針用前用后進(jìn)行火焰滅菌。

5、工作結(jié)束做好終末消毒，所有帶菌培養(yǎng)物均應(yīng)高壓滅菌后再扔掉，以免污染環(huán)境。

五、菌落總數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)

1、選取樣品要有代表性，如為固體樣品要多采幾個(gè)部位，液體檢樣要混勻。

2、每次做樣從開始到結(jié)束都要進(jìn)行超凈臺(tái)空氣凈度的監(jiān)測(cè)，同時(shí)對(duì)所有滅菌物品做空白對(duì)照。

3、為減少稀釋倍數(shù)的誤差，在做連續(xù)遞增稀釋時(shí)，每一稀釋液應(yīng)充分振搖使其均勻，同時(shí)每一稀釋度換一支吸管。

4、在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿壁流入，勿使吸管尖端觸及稀釋液。

5、傾倒營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板時(shí)，溫度要在46±10之間，數(shù)量要在15ml左右為宜，不要太多太少。

6、培養(yǎng)物48h培養(yǎng)后培養(yǎng)基失重不宜超過15%。

7、檢樣加入平皿后應(yīng)立即傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻，一般從稀釋到傾注不超過20分鐘。

8、平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)：菌落之間無明顯界限且僅有一條鏈可視為一個(gè)菌落，如為不同來源的幾條鏈則將每條鏈各做一個(gè)菌落記。

9、做菌落記數(shù)時(shí)平板里所有的菌落都要記數(shù)。

六、大腸菌群注意事項(xiàng)

1、對(duì)乳糖膽鹽管產(chǎn)氣的觀察只要有氣泡往上冒就算產(chǎn)氣。

2、在伊紅美蘭瓊脂平板上挑取菌落時(shí)一定要選典型菌落。

七、霉菌、酵母菌檢驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、稀釋樣品時(shí)用無菌水。

2、3天觀察時(shí)把所有的酵母菌做標(biāo)記。

3、如果有霉菌被培養(yǎng)出，請(qǐng)不要把皿蓋隨便打開，待培養(yǎng)物高壓滅菌后再清洗。

八、壞包分析注意事項(xiàng)

1、對(duì)已開包的酸包脹包要馬上轉(zhuǎn)移到無菌瓶中，以防二次污染。

2、根據(jù)壞包的不同表現(xiàn)狀態(tài)適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)項(xiàng)目。

3、做微生物培養(yǎng)的同時(shí)測(cè)定感官、理化指標(biāo)，注意其有何變化。

九、商業(yè)無菌注意事項(xiàng)

1、要求有厭氧培養(yǎng)的一定要在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。

2、取樣測(cè)pH值，要與同批正常樣相比，看是否有顯著差異。

3、對(duì)pH 值有可疑的樣品都要做涂片染色鏡檢，與同批正常樣相比，看是否有明顯的微生物增殖現(xiàn)象。

4、保溫期間出現(xiàn)的脹包，漏包、或開包發(fā)現(xiàn)pH、感官異常、腐敗變質(zhì)，進(jìn)一步鏡檢發(fā)現(xiàn)有異常數(shù)量細(xì)菌的樣品均應(yīng)進(jìn)行劃線培養(yǎng)。