一、培養(yǎng)基的滅菌及使用

（1）每次進(jìn)行培養(yǎng)基配置時，要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi)，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質(zhì)，并且未吸潮。

（2）培養(yǎng)基配置時，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。

（3）一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長時間放置，更不可隔夜。

（4）培養(yǎng)基滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效滅菌時間。

（5）滅菌過的培養(yǎng)基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的培養(yǎng)基要先使用。

（6）在使用時，要根據(jù)當(dāng)班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài)，然后及時調(diào)低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。

（7）做產(chǎn)品微生物檢測時，傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死；也不可過涼，化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固，不便于觀察結(jié)果。

（8）每瓶培養(yǎng)基均要做空白。

（9）盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。

（10）培養(yǎng)基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環(huán)境的維持

（1）大環(huán)境（房間）

1）微生物檢測做樣時，窗戶和空調(diào)要關(guān)閉，或用酒精對房間進(jìn)行噴霧消毒，避免房間內(nèi)空氣流通影響安全柜內(nèi)部環(huán)境（最好在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間進(jìn)行操作）。

2）如果在原來的原料微生物檢測室進(jìn)行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進(jìn)行殺菌。

（2）小環(huán)境（生物安全柜）

1）工作前準(zhǔn)備

a. 首先微生物檢測實(shí)驗(yàn)室生物安全柜打開紫外燈照射30分鐘

b. 關(guān)紫外燈，打開生物安全安全柜的日光燈和風(fēng)機(jī)，用消毒劑對生物安全柜的內(nèi)表面進(jìn)行消毒擦拭

c. 將實(shí)驗(yàn)中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應(yīng)位置上（切記勿阻擋風(fēng)口?。?/p>

d. 等待5min，凈化工作區(qū)的空氣污染物

2）操作規(guī)范

a. 微生物檢測實(shí)驗(yàn)過程中，雙臂垂直緩慢進(jìn)入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢后才可對物品進(jìn)行處理。

b. 所有操作應(yīng)在離前窗10cm以外的工作區(qū)進(jìn)行。

c. 廢棄物應(yīng)丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中。

3）微生物檢測實(shí)驗(yàn)操作時注意事項(xiàng)

a. 雙避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進(jìn)出

b. 盡量避免污染的物品進(jìn)入潔凈區(qū)

c. 避免使用明火干擾氣流，可使用微型電加熱器，最好使用一次性接種環(huán)。

d. 在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作時，不能進(jìn)行文字工作

e. 盡量減少操作者身后的人員活動。

4）工作結(jié)束后的要求

a. 將生物安全柜繼續(xù)運(yùn)行至少3min來完成“凈化”過程

b. 將柜內(nèi)物品移出前，應(yīng)使用有效的消毒劑擦拭（特別是霉菌）

c. 每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對生物安全柜的內(nèi)壁和臺面進(jìn)行擦拭

d. 等待5分鐘后，關(guān)閉前窗，關(guān)燈，關(guān)風(fēng)機(jī)，紫外燈照射30分鐘

三、 工器具的潔凈度

（1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌。

（2）做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌。

（3）接種針（環(huán)）采用灼燒方式進(jìn)行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻。

四、樣品的采集及微生物檢測

（1）保證采樣器具的無菌性

1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報廢）。

2）取樣筐：使用前要用75%酒精進(jìn)行噴灑消毒。

3）取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。

4）取樣袋：可先用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在安全柜用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

5）電子稱表面用 75%酒精消毒。

（2）人員操作

1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2）取樣要具有代表性（隨機(jī)樣、目的樣、綜合樣）且要標(biāo)示清楚。

3）取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入安全柜，對其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒。

4）在要求的做樣區(qū)域進(jìn)行操作。

5）做樣前，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M(jìn)行擦拭消毒，再開口。

6）往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7）樣品計(jì)量要準(zhǔn)確，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進(jìn)行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8）鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。

9）進(jìn)行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10）傾倒平皿時，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量，不可以太少，在培養(yǎng)過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11）做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好，放入安全柜對外表面進(jìn)行紫外線滅菌。

12）接二步時，要注意先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻，避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生，導(dǎo)致無法判斷、確認(rèn)。

13）做樣完畢，及時放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，并清理清潔安全柜。

五、 微生物的培養(yǎng)

（1）在培養(yǎng)過程中，要隨時監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度，保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。

（2）要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常，要及時分析原因進(jìn)行反饋。