菌落總數(shù)檢測過程中TTC添加常見問題解答
發(fā)布時間：2019-12-03 瀏覽次數(shù)：2571
從事微生物檢測的朋友都知道，在菌落總數(shù)檢測時，經(jīng)常添加TTC這種物質(zhì)，哪什么是TTC？添加TTC又有什么作用？
TTC: 俗稱紅四氮唑，學(xué)名2,3,5-三苯基氯化四氮唑，化學(xué)式如下：
在菌落總數(shù)檢測時，添加TTC可以起到兩方面的作用：
其一，TTC可以使菌落顯紅色，便于區(qū)分菌落和雜質(zhì)，更利于計數(shù)；
其二，TTC可以有效的防止平板上的菌落蔓延情況。這兩種作用的原理是不同的，TTC溶于水是無色的，而嗜中溫性需氧菌在新陳代謝過程中產(chǎn)生的琥珀脫氫酶可以使無色的TTC被還原成紅色的TPF，使菌落顯色，這是顯色的原理；同時TTC還具有抑制某些革蘭氏陽性菌生長的作用，因此會防止菌落蔓延。但既然會抑制細(xì)菌的生長，那會不會造成檢測誤差呢？其實只要合理使用，注意添加量，對檢測結(jié)果的影響并不是很大，是可以忽略不計的。
有專家對此做過實驗，實驗結(jié)果表明培養(yǎng)基內(nèi)TTC濃度在0.0003%-0.001%（w/v）的范圍內(nèi)對菌落生長抑制作用不顯著，但濃度太低菌落的顯色效果并不是很好，因此推薦大家按照TTC濃度為0.0005%的量來添加就不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生較大影響，還會使菌落顯色方便計數(shù)。為了方便大家在檢測過程中方便添加，小編特意做了一個表格，方便大家查詢：
除了添加量之外，菌落總數(shù)檢測時使用TTC過程中我們還應(yīng)該注意以下幾點：
要點1：TTC的配制過程，一定要在無菌條件下進(jìn)行。因為我們配制好的TTC溶液在檢測時是直接加入到培養(yǎng)基中的，必須保證TTC溶液時無菌的，配制用水也必須是無菌水。
要點2：TTC具有比較強(qiáng)的光敏性，見光易分解，因此無論是TTC粉末還是配制好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存，配制好的溶液一定要放在棕色的試劑瓶里。
要點3：TTC溶液要在菌落總數(shù)檢測過程中直接加入滅菌完的培養(yǎng)基中，即在傾倒平皿之前加入培養(yǎng)基然后搖勻使用。盡量不要將TTC溶液加入培養(yǎng)基后一起滅菌，這樣操作會使培養(yǎng)基顏色加深，不利于顯色和計數(shù)。
要點4：若顯色效果不是很好，可以考慮提高一下TTC濃度，但不要超過0.001%的濃度，否則會使檢測結(jié)果出現(xiàn)比較大的偏差。
要點5：加TTC溶液還可以有效的控制平板培養(yǎng)基上的菌落蔓延情況，若是添加試劑的主要目的是為了控制菌落蔓延，建議增加培養(yǎng)基中TTC的濃度，濃度大約0.0008%時就會起到比較好的效果，并且不會影響結(jié)果。
任何方法都會是雙刃劍，添加TTC顯色當(dāng)然也是如此，添加TTC最主要的問題就是它的抑菌作用，會造成檢測結(jié)果偏低，因此很多人不愿使用。其實若是不存在雜質(zhì)干擾或者一些特殊情況可以比較精確的計數(shù)，小編也建議大家不要一昧因為顯色之后容易計數(shù)就進(jìn)行添加，畢竟這只是在一些特殊情況下采用的非常規(guī)手段。
