懸滴法

用懸滴法，通過(guò)鏡檢觀察細(xì)菌細(xì)胞是否具有運(yùn)動(dòng)性，可以通過(guò)普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時(shí)光線不宜太強(qiáng)，要適當(dāng)減弱。具體操作步驟方法如下。

待測(cè)菌株先在肉湯中培養(yǎng)18 h~24 h,也可以從生長(zhǎng)了18 h-24 h的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上挑取少量菌落用1滴肉湯或生理鹽水乳化，注意菌株的濃度不要太大。通過(guò)以下方法可以將1滴菌懸液懸浮在凹槽載玻片的蓋玻片上。

1. 具體操作步驟

（1）取一潔凈的蓋玻片，在蓋玻片四周點(diǎn)上凡士林(見(jiàn)圖5-16)。

（2）用接種環(huán)挑取一小環(huán)菌株置于操作好的干凈蓋玻片上，不要讓液滴散開(kāi)(見(jiàn)圖5-17)。

（3）將凹槽載玻片蓋在蓋玻片上，保持菌滴在槽中間，緩慢用力壓下載玻片，借助凡士林的黏性使載玻片和蓋玻片結(jié)合在一起(見(jiàn)圖5-18),快速平穩(wěn)地將玻片反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，菌滴應(yīng)處于懸滴狀態(tài)(見(jiàn)圖5-19)。盡快觀察。

（4）觀察懸滴玻片時(shí)，將鏡下聚光鏡從其正常位置略微下調(diào)，并使光圈幾乎處于全關(guān)閉狀態(tài)。這是因?yàn)槲慈旧木w在太亮的環(huán)境下難于被觀察到，而且，光造成的熱效應(yīng)會(huì)使菌體喪失運(yùn)動(dòng)性。

（5）首先用低倍物鏡聚焦懸液的邊緣，移動(dòng)載玻片，讓?xiě)乙涸谝曇暗闹醒?。通過(guò)觀察液滴邊緣線外出現(xiàn)的小冷凝水滴能夠很容易識(shí)別出懸滴的位置。換成高倍物鏡(40倍)對(duì)液滴邊緣重新聚焦。必要時(shí)，略微打開(kāi)光圈。這時(shí)細(xì)菌應(yīng)很容易觀察到，尤其在液滴的邊緣，深度較淺，細(xì)菌停留在有限的空間領(lǐng)域。用油鏡觀察玻片時(shí)，因?yàn)榫劢箷r(shí)鏡頭的移動(dòng)可能造成蓋玻片移動(dòng)，從而造成液滴流動(dòng)。這會(huì)嚴(yán)重影響觀察效果，沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)的人員甚至還會(huì)誤認(rèn)為是菌體在運(yùn)動(dòng)。

注意：必須正確區(qū)分布朗運(yùn)動(dòng)(一種液體中懸浮的微小粒子的連續(xù)運(yùn)動(dòng)，是由于液體周圍的分子不對(duì)稱的撞擊造成的)、玻片輕微傾斜造成的一個(gè)方向上的漂移和真正的菌體運(yùn)動(dòng)。

有時(shí)可以根據(jù)運(yùn)動(dòng)方式的不同來(lái)鑒定菌種，如李斯特氏菌是翻跟頭式的運(yùn)動(dòng)，噬胞菌為滑行運(yùn)動(dòng)。要想通過(guò)運(yùn)動(dòng)方式來(lái)鑒定菌種，就必須熟悉不同菌種的運(yùn)動(dòng)方式，觀察比較已知菌株的運(yùn)動(dòng)情況可以不斷積累經(jīng)驗(yàn)。

2. 注意事項(xiàng)

檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

（1）細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為運(yùn)動(dòng)性。由于細(xì)菌細(xì)胞太小，在懸液中有布朗運(yùn)動(dòng)，即每個(gè)細(xì)胞均在原地顫動(dòng)，彼此的位置關(guān)系卻沒(méi)改變，切不可將這種現(xiàn)象誤判為具運(yùn)動(dòng)性。由于載玻片與蓋玻片之間懸液過(guò)多，在使用油浸物鏡調(diào)焦時(shí)，懸液在蓋玻片下流動(dòng)。這時(shí)可看到大批細(xì)菌細(xì)胞都以同一速度向同一方向運(yùn)動(dòng)，這也不是真正的運(yùn)動(dòng)性。真正的運(yùn)動(dòng)性應(yīng)是細(xì)菌細(xì)胞彼此的位置關(guān)系明顯的改變。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性因種或菌株而異。有的運(yùn)動(dòng)迅速，有的運(yùn)動(dòng)緩慢。能運(yùn)動(dòng)的菌株也不一定每個(gè)細(xì)胞都同時(shí)運(yùn)動(dòng)，常常是大多數(shù)細(xì)胞不運(yùn)動(dòng)，少數(shù)細(xì)胞明顯運(yùn)動(dòng)。

（2）有些細(xì)胞不以鞭毛運(yùn)動(dòng)，而是滑動(dòng)。鏡檢時(shí)應(yīng)注意與游動(dòng)區(qū)分開(kāi)。一般游動(dòng)速度高，滑動(dòng)則遲緩。游動(dòng)只能在懸液中運(yùn)動(dòng)，滑動(dòng)則須附在固體表面進(jìn)行。

（3）如室溫太低，以致載物臺(tái)溫度太低。有的細(xì)菌會(huì)因溫度太低而不能運(yùn)動(dòng)，應(yīng)該設(shè)法提高載物臺(tái)或載玻片的溫度，達(dá)到試驗(yàn)菌能運(yùn)動(dòng)的溫度(如在室溫較高的試驗(yàn)室鏡檢，或?qū)⑤d玻片放置保溫箱中一會(huì)兒再觀察)。

（4）鏡檢好氧菌時(shí)，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗(yàn)菌不能表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)性，遇到這種情況則應(yīng)使蓋玻片下殘留一兩個(gè)小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋玻片邊緣的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性。

（5）用油鏡觀察時(shí)，蓋玻片的厚度以不超過(guò)0. 17 mm為宜。用過(guò)厚的蓋玻片，調(diào)焦有困難。用相差油鏡觀察時(shí)載玻片的厚度以約為1.2 mm為宜。

半固體穿刺

根據(jù)有鞭毛的細(xì)菌可以在半固體培養(yǎng)基中游動(dòng)卻又不能任意游走的現(xiàn)象，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，判定試驗(yàn)菌是否有運(yùn)動(dòng)性，可使用試驗(yàn)菌能良好生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，在其中加入0.3%~0.6%的瓊脂(所用瓊脂的量可因品牌不同而異),一般半固體培養(yǎng)基應(yīng)是放倒試管不流動(dòng)，而在手上輕輕敲打時(shí)瓊脂即破裂為宜。對(duì)一般常見(jiàn)細(xì)菌可結(jié)合葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)觀察運(yùn)動(dòng)性。

用直針穿刺接種試驗(yàn)菌于半固體培養(yǎng)基內(nèi)(見(jiàn)圖5-20),適溫培養(yǎng)。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性可用透射光目測(cè)。如生長(zhǎng)物只生長(zhǎng)在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗(yàn)菌無(wú)運(yùn)動(dòng)性；如生長(zhǎng)物由穿刺線向四周呈云霧狀擴(kuò)散，其邊緣呈云霧狀，則表明試驗(yàn)菌株有運(yùn)動(dòng)性。對(duì)生長(zhǎng)快的細(xì)菌培養(yǎng)1d后觀察。如第一天不能判定可在第2d-3d再觀察。如2d-3d時(shí)仍不能判定是否有運(yùn)動(dòng)性，可延遲5d-6d再觀察一次。因?yàn)橛蝿?dòng)力弱的細(xì)菌，在半固體培養(yǎng)基中第1d-2d中尚不能從穿刺線游開(kāi)，故需多培養(yǎng)幾天再觀察。如試驗(yàn)菌在半固體培養(yǎng)基中產(chǎn)氣泡會(huì)影響穿刺線上的生長(zhǎng)物的擴(kuò)散情況，不可誤將不運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌判為有運(yùn)動(dòng)性。如試驗(yàn)菌是好氧細(xì)菌，穿刺線上生長(zhǎng)物很少，可檢查從培養(yǎng)基表面向下滲入的生長(zhǎng)物的情況。

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