單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡稱單增李斯特菌，是一種人畜共患病的病原菌。國際上公認的李斯特菌共有十個菌株，而其中單增李斯特菌是唯一能引起人類疾病的菌株。單增李斯特菌進入人體是否得病，與菌量、宿主的免疫狀態(tài)有關，因為該菌是一種細胞內(nèi)寄生菌，宿主對它的清除主要靠細胞免疫功能，因此，新生兒、孕婦、40歲以上的成人，或免疫功能缺陷者很容易受到感染。健康成人個體感染后，單核細胞增多，會出現(xiàn)輕微類似流感癥狀；新生兒、孕婦、免疫缺陷患者感染后，表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結(jié)膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)、腦膜炎、敗血癥等，直至死亡。

    單增李斯特菌廣泛存在于自然界中，它也是某些食物（主要是牛奶和乳制品，其他如肉類(特別是牛肉)；蔬菜；沙拉；海產(chǎn)品；冰淇凌等）中的一種污染物，能引起嚴重食物中毒。該菌能在2-42 ℃下生存(也有報道0 ℃能緩慢生長)，能在冰箱冷藏室內(nèi)較長時間生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一，因此在食品衛(wèi)生微生物檢驗中，必須加以重視。

    廣東環(huán)凱微生物科技有限公司長期從事微生物控制和檢測的相關研究，是我國最早研究、開發(fā)食品微生物安全檢測產(chǎn)品的廠家之一，對微生物檢測試劑有著成熟的研發(fā)及生產(chǎn)經(jīng)驗。我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位對單增李斯特菌檢測的需求及情況，對單增李斯特菌檢驗相應的培養(yǎng)基進行了改進，使得單增李斯特菌檢出率較之前有很大的改進。擴充并完善了相關的微生物檢測試劑，使得技術操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。

    單增李斯特菌為革蘭氏陽性短桿菌,直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀；兼性厭氧、無芽胞；一般不形成莢膜，但在營養(yǎng)豐富的環(huán)境中可形成莢膜；在陳舊培養(yǎng)中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性；該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。該菌營養(yǎng)要求不高，在20-25 ℃培養(yǎng)有動力，穿刺培養(yǎng)2-5天可見倒立傘狀生長，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見翻跟斗運動。在的血平板上菌落中等大小，灰白色，可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。

    LB₁與LB₂中胰胨、多價胨和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉，同時對腸球菌起抑制作用；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩沖劑；七葉苷為可發(fā)酵的糖類；萘啶酮酸對革蘭氏陰性桿菌的抑制性較強，而鹽酸吖啶黃素對除李斯特氏菌的革蘭氏陽性菌有較強的抑制作用，LB1與LB2兩種培養(yǎng)基對兩種藥物的的配比進行了調(diào)整，一前一后進行選擇性增菌，使得操作人員能順利的將李斯特氏菌從樣品中篩選出來。

    李斯特氏菌雖對營養(yǎng)要求不高，但若營養(yǎng)不充分，在培養(yǎng)基上的菌落在接種后的一段時間內(nèi)將難以用肉眼觀察到，特別是對于剛剛復蘇的菌株，而0.6 %酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)能滿足李斯特氏菌的營養(yǎng)要求， 一般情況下利用其做純化培養(yǎng)；改良Mc Bride(MMA)瓊脂及TSA-YE上，用45°角入射光照射菌落，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。其成分中甘氨酸、氯化鋰、苯乙醇和復達欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，但MMA抑制性過強，對李斯特氏菌的生長也有一定影響，所以其平板上菌落較小、形態(tài)不典型，很難與雜菌區(qū)分，因此，根據(jù)長期使用經(jīng)驗及實驗結(jié)果結(jié)合參考文獻，很多標準進行了修訂,采用PALCAM和單增李斯特菌顯色培養(yǎng)基對李斯特氏菌進行平板分離。

    PALCAM瓊脂中，蛋白胨提供生長必須的碳氮源；酵母膏粉和淀粉提供碳氮源、維生素和生長因子；氯化鈉可維持均衡的滲透壓；葡萄糖提供碳源；李斯特氏菌水解七葉苷與鐵離子反應形成黑色的6,7-二羥基香豆素；甘露醇是可發(fā)酵的糖，酚紅是pH指示劑；氯化鋰和其它的抗生素能抑制革蘭氏陰性菌和大多數(shù)革蘭氏陽性菌。李斯特氏菌在PALCAM平板上生長24h后菌落呈黑色，直徑為1mm，在其周圍形成一個黑色環(huán)，培養(yǎng)48h，菌落仍呈黑色，直徑2mm～3mm，除在菌落周圍有一環(huán)外，在菌落中心部位的深層也形成黑點。

     李斯特菌顯色培養(yǎng)基中，利用李斯特氏菌中特有的酶類及其作用，使不同的菌種顯現(xiàn)出不同的菌落形態(tài)，環(huán)凱CRM014李斯特顯色培養(yǎng)基中—單增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)顯藍色，菌落周圍有一不透明環(huán)，英諾克李斯特氏菌（Listeria innocua）在該培養(yǎng)基中同樣顯藍色，但菌落周圍無不透明環(huán)。

培養(yǎng)基：PALCAM瓊脂	培養(yǎng)基：李斯特顯色培養(yǎng)基

　  依據(jù)GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗，我公司推出了一套單核細胞增生李斯特氏菌檢驗解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗單位提供方便。

 

圖1：GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程圖

 

表1：實驗操作所用培養(yǎng)基及生化試劑

 

功能階段	實驗 序號	產(chǎn)品序號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	類別
增菌	1	CP0490	LB1增菌液	225mL×6瓶	盒（瓶裝）
026040	李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎	250g	瓶（干粉）
SR0100	李氏增菌肉湯LB1配套試劑	10支	盒（西林瓶）
2	CP0500	LB2增菌液	225mL×6瓶	盒（瓶裝）
026040	李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎	250g	瓶（干粉）
SR0110	李氏增菌肉湯LB2配套試劑	10支	盒（西林瓶）
平板分離	3	026070	PALCAM瓊脂培養(yǎng)基	250g	瓶（干粉）
SR0140	PALCAM瓊脂配套試劑	10支	盒（西林瓶）
4	CRM014	李斯特菌顯色培養(yǎng)基	1000 mL	瓶（干粉）
CRM014 P1	李斯特菌顯色培養(yǎng)基平板	90mm×20	盒（平板）
初篩	5	075070	木糖	20支	盒（西林瓶）
6	075110	鼠李糖	20支	盒（西林瓶）
7	026020	胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA-YE）	250g	瓶（干粉）
026020A	胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂平板（TSA-YE）	90mm×20	盒（平板）
生理生化	8	029010	革蘭氏染色液	10ml×4瓶	盒
10	075660	SIM培養(yǎng)管（SIM動力培養(yǎng)基）	20支	盒（西林瓶）
026050	半固體瓊脂	250g	瓶（干粉）
075350A	半固體瓊脂	10 ml×20支	盒（管裝）
075350	半固體瓊脂	20支	盒（西林瓶）
11	029161	過氧化氫酶試劑	2 mL/支×10	盒
12	075010	葡萄糖	20支	盒（西林瓶）
13	075030	麥芽糖	20支	盒（西林瓶）
14	075040	甘露醇	20支	盒（西林瓶）
15	075070	木糖	20支	盒（西林瓶）
16	075140	七葉苷	20支	盒（西林瓶）
17	075250	葡萄糖磷酸鹽胨水	20支	盒（西林瓶）
029040	甲基紅試劑	10 mL	瓶
029050	VP試劑	10 ml×2	盒
18	024070	血平板（成品培養(yǎng)基）	90mm×20	盒（平板）
024060	血瓊脂基礎	250g	瓶（干粉）
19	ATCC 6538	金黃色葡萄球菌		盒（西林瓶）
ATCC 25923	金黃色葡萄球菌		盒（西林瓶）
CMCC(B) 26003	金黃色葡萄球菌		盒（西林瓶）
20	071820	單核增生性李斯特氏菌生化鑒定盒	10種×10次	盒（西林瓶）
21	HK-MID-67	HK-MID-Listeria李斯特氏菌鑒定系統(tǒng)	10 tests	盒
選作項目
生理生化	22	026010	胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯（TSB-YE） (EB增菌液基礎）	250g	瓶（干粉）
SR0090	EB增菌液配套試劑	10支	盒（西林瓶）

  在日常生活匯總，由于單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長繁殖，所以冰箱食品需加熱后再食用，防止食物中毒的危險， 

  在食品生產(chǎn)行業(yè)中，單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競爭的環(huán)境條件下易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達到70℃持續(xù)2分鐘以上。

 

相關國標下載地址：

 

GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗

http://www.huankai.com/Train/HBdetail_105020015_100000035133931.html