圖1：HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)套盒包含產(chǎn)品

HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)使用方案

    以GB 4789.30-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程為例（或其他標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)流程）,將可疑菌落篩選出后，用TSA-YE平板劃線純化。如下圖中的初篩步驟。

圖2：GB 4789.30-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程圖

國標(biāo)中涉及到的培養(yǎng)基及試劑可參考

    在對(duì)可疑菌株進(jìn)行純化后。圖2紅色方框中的鑒定步驟可用下列鑒定方法進(jìn)行替代，以達(dá)到簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)，減少工作量的目的。

    首先，必須確認(rèn)可疑菌株為李斯特氏菌屬。

1：李斯特氏菌屬鑒定（如實(shí)驗(yàn)安排合理，可當(dāng)天觀察到結(jié)果）

1.1：革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)。

1.2：氧化酶實(shí)驗(yàn)。

1.3：觸酶（過氧化氫酶）實(shí)驗(yàn)

1.4：動(dòng)力實(shí)驗(yàn)（25 ℃和37 ℃）。在圖1中初篩步驟劃線TSA-YE的同時(shí)接種半固體瓊脂做動(dòng)力實(shí)驗(yàn)，通過此步，可在后一天協(xié)同其他實(shí)驗(yàn)共同確定是否是李斯特軍屬。

    如仍然不能確定，可使用李斯特氏菌乳膠凝集試劑進(jìn)行確定。

    上述四個(gè)步驟的實(shí)驗(yàn)用品不包含在HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)的鑒定條中需另外購置

    此五個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：革蘭氏陽性短桿菌，氧化酶陰性，觸酶陽性，在25℃培養(yǎng)具有動(dòng)力，但在37℃培養(yǎng)則無動(dòng)力，可確認(rèn)其為李斯特氏菌屬。之后，使用HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)對(duì)對(duì)可疑菌進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。

2：HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)使用方法

2.1：試劑條使用說明

1）菌懸液制備好后，用無菌滴管加4滴（約100微升）菌懸肉湯至每個(gè)反應(yīng)小管；

2）向管12中加入1滴溶血素試劑；

3）用粘性封口膜或鑒定條蓋封口，放至35-37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)。

2.2：結(jié)果觀察

    培養(yǎng)結(jié)束后，對(duì)應(yīng)反應(yīng)結(jié)果對(duì)照表（說明書背面）讀取結(jié)果，填寫在結(jié)果記錄報(bào)告單上。

注：溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果：檢查小管的底部，若覆蓋著一層清晰的血紅細(xì)胞，而底部血紅細(xì)胞層上方呈現(xiàn)透明的溶液結(jié)果為陰性 ；若底部無清晰的血紅細(xì)胞層，上方出現(xiàn)黃褐色的均勻溶液，則結(jié)果為陽性。

2.3：軟件使用

    在鑒定結(jié)果記錄表中，所有反應(yīng)都被分配在三元組中（三個(gè)反應(yīng)為一組），每個(gè)反應(yīng)下面均標(biāo)有對(duì)應(yīng)的數(shù)值1、2、4，將每組中陽性反應(yīng)對(duì)應(yīng)的數(shù)值加起來將得到一個(gè)四位數(shù)，作為信息代碼（Octal Code），將這個(gè)信息代碼輸入Microgen鑒定軟件系統(tǒng)中，系統(tǒng)將顯示出數(shù)據(jù)庫中5個(gè)最接近結(jié)果的菌種，從而得到鑒定結(jié)果。

詳細(xì)的MID鑒定系統(tǒng)使用方法，參見

    總結(jié)：使用該鑒定方案，可以從原來的至少2 天（最長(zhǎng)4天）的鑒定時(shí)間，縮短到1天（總體李斯特氏菌篩選檢驗(yàn)的時(shí)間由6~10天縮短到5~7天），為企業(yè)的生產(chǎn)爭(zhēng)取了寶貴的時(shí)間。

相關(guān)國標(biāo)下載地址