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嬰幼兒配方食品中克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗(yàn)解決方案

發(fā)布時(shí)間：2018-08-13      瀏覽次數(shù)：3749    分享：

 我公司針對(duì)目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測(cè)單位檢驗(yàn)阪崎腸桿菌的需求及情況，對(duì)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)相應(yīng)的技術(shù)改進(jìn)，使得阪崎腸桿菌檢出率較之前有很大的改進(jìn)。擴(kuò)充并完善了相關(guān)的微生物檢測(cè)試劑，使得技術(shù)操作人員能更準(zhǔn)確、快捷的檢測(cè)出目標(biāo)菌。

方案一：傳統(tǒng)微生物檢測(cè)法 

       依據(jù)GB 4789.40-2016食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗(yàn)，推出成套的阪崎腸桿菌檢驗(yàn)解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗(yàn)單位提供方便。 

  

第一法 克羅諾桿菌屬定性檢驗(yàn) 操作步驟 

1.1 前增菌和增菌 取檢樣100 g（mL）加入已預(yù)熱至44 ℃裝有900 mL 緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地?fù)u動(dòng)至充分溶解，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2h。 

1.2 分離 1.2.1 輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物1 環(huán)，分別劃線接種于兩個(gè)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。 1.2.2 挑取至少5個(gè)可疑菌落，劃線接種于TSA 平板。25 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±4 h。 

1.3 鑒定 自TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化鑒定?？肆_諾桿菌屬的主要生化特征見(jiàn)表2?？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。

克羅諾桿菌屬的主要生化特征 

生化試驗(yàn)

特征

黃色素產(chǎn)生

+

氧化酶

-

L-賴(lài)氨酸脫羧酶

-

L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酶

（+）

L-精氨酸雙水解酶

+

檸檬酸水解

（+）

發(fā)酵

D-山梨糖

（-）

L-鼠李糖

+

D-蔗糖

+

D-蜜二糖

+

苦杏仁甙

+

注：+＞99%陽(yáng)性： -＞99%陰性；（+）90%-99%陽(yáng)性；（-）

1.4 結(jié)果與報(bào)告 綜合菌落形態(tài)和生化特征，報(bào)告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌屬。 

第二法 克羅諾桿菌屬的計(jì)數(shù) 操作步驟 

2.1 樣品的稀釋 2.1.1 固體和半固體樣品：無(wú)菌稱(chēng)取樣品100 g、10 g、1 g 各三份，加入已預(yù)熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分溶解，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。 2.1.2 液體樣品：以無(wú)菌吸管分別取樣品100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已預(yù)熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分混勻，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h±2h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。 

2.2 分離、鑒定 同1.2，1.3。 

2.3 結(jié)果與報(bào)告 綜合菌落形態(tài)、生化特征，根據(jù)證實(shí)為克羅諾桿菌屬的陽(yáng)性管數(shù)，查MPN 檢索表，報(bào)告每100 g（mL）樣品中克羅諾桿菌屬的MPN 值（見(jiàn)國(guó)標(biāo)附錄Ｂ中表B.1）。 

實(shí)驗(yàn)操作所用培養(yǎng)基及生化試劑

功能階段

實(shí)驗(yàn)
序號(hào)

產(chǎn)品序號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

類(lèi)別

前增菌

1

023130

緩沖蛋白胨水（BPW）

250g

瓶（干粉）

CP0560A

緩沖蛋白胨水（BPW）

9 ml×20支

盒（管裝）

增菌

2

022212

改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯基礎(chǔ)（MLST）

250g

瓶（干粉）

SR0180

萬(wàn)古霉素（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯配套試劑）
每支添加于100 ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中

1 ml×10支

盒（西林瓶）

CP0750

改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（MLST-Vm）

10 ml×20支

盒（管裝）

平板分離

3

CRM006

阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI）

1000 mL

瓶（干粉）

CRM006B

阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI）

90mm×20

盒（平板）

生化鑒定

4

024072

胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA

250g

瓶（干粉）

024079

胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA

90mm×20

盒（平板）

5

029170

氧化酶試紙

10片/盒

盒

6

075280

L-賴(lài)氨酸脫羧酶培養(yǎng)基

20支

盒（西林瓶）

075290

氨基酸脫羧酶對(duì)照

20支

盒（西林瓶）

7

075270

L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酶培養(yǎng)基

20支

盒（西林瓶）

8

075590

L-精氨酸雙水解酶培養(yǎng)基

20支

盒（西林瓶）

075600

精氨酸雙水解酶對(duì)照

20支

盒（西林瓶）

9

029110

無(wú)菌液體石蠟

10 mL×1支

瓶

10

075090

D-山梨醇

20支

盒（西林瓶）

11

075110

L-鼠李糖

20支

盒（西林瓶）

12

075050

D-蔗糖

20支

盒（西林瓶）

13

075560

D-蜜二糖

20支

盒（西林瓶）

14

022120

西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基

250 g

瓶（干粉）

15

071870

阪崎腸桿菌生化鑒定盒

11種×10支

盒（西林瓶）


不同培養(yǎng)基下菌種顯現(xiàn)出不同的菌落形態(tài)（菌株：阪崎腸桿菌 ATCC29544） 

                  培養(yǎng)基：TSA                                 培養(yǎng)基：阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基DFI

方案二：恒溫?zé)晒饪焖贆z測(cè)法 

基于核酸水平的快速檢測(cè)技術(shù)目前日臻發(fā)展成熟，不少分子檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)寫(xiě)入標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中，比如PCR、LAMP技術(shù)；我司推出基于恒溫?zé)晒鈾z測(cè)技術(shù)的微生物快速試劑盒，可用于食源性致病菌，包括阪崎腸桿菌。該試劑盒無(wú)需常規(guī)PCR中變性、退火、延伸等步驟不同溫度設(shè)計(jì)要求，只需提供一個(gè)適宜的恒定溫度即可。 因此，與常規(guī)PCR相比，恒溫?zé)晒鈾z測(cè)技術(shù)更適合現(xiàn)場(chǎng)高通量快速檢測(cè)，具有簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。 

操作流程圖 

 

所需試劑、儀器及耗材列表

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

備注

阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>

24test/盒

詳見(jiàn)“產(chǎn)品信息1”

緩沖胨水增菌液BPW

250g/瓶

 

移液槍、槍頭

1-10 μL、10-200 μL和100-1000 μL各一把

槍頭推薦國(guó)產(chǎn)槍頭即可。

離心機(jī)

最大轉(zhuǎn)速不低于12,000 rpm，離心機(jī)轉(zhuǎn)子支持200 μL和1.5 mL離心管離心。

詳見(jiàn)“產(chǎn)品信息2”

恒溫金屬浴

——

詳見(jiàn)“產(chǎn)品信息3”

 產(chǎn)品信息1、阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ┰噭┖薪M成 

 產(chǎn)品信息2、 

產(chǎn)品信息3、 

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